|
|
Testing of biological effect of glucans on cell lines in vitro
Šimková, Eva ; Holub, Jiří (referee) ; Němcová, Andrea (advisor)
The aim of this bachelor thesis is isolation and testing of -glucans from selected strains of yeast. In the theoretical part, characterisation of -glucans, microbial production of -glucans by yeast, determination of polysaccharides, exopolysaccharides and in vitro testing are described. Yeast have a cell wall made up of -glucans and -glucans are known for their healing properties. In the experimental part of this work deals with characterization of selected biomass yeasts in different forms and comparison of their effects and the amount of -glucans in each form. Stains of Metschnikowia pulcherrima, Cystofilobasidium infirmominiatum and Rhodotorula kratochvilovae have been selected for this thesis. Subsequently, the thesis deals with the isolation and testing of isolated -glucans from a selected lyophilised strain of yeast Rhodotorula kratochvilovae. The selected strain was isolated in 2 ways. The first method of isolation that was more friendly to conformation of -glucans due to the effect of ultrasonic homogenization of cells. The second method of isolation was less friendly to -glucans, using acid and base to homogenise them. Analyses of both extraction methods confirmed the presence of isolated -glucans, however it was found that the recovery of both methods was relatively low and requires further optimisation of the procedure. Overall, the better extraction procedure was the second method. A sample of this extract was further tested on the HaCaT cell line. The results of the pilot tests confirmed the cytotoxicity of the extract obtained by us.
|
|
|
PRODUCTION OF BETA-GLUCANS AND OTHER POLYSACCHARIDES BY YEAST AND MICROALGAE
Byrtusová, Dana ; Kráčmar, Stanislav (referee) ; Kovalčík, Adriána (referee) ; Márová, Ivana (advisor)
Beta-glukany jsou polysacharidy složeny z monomerů D-glukózy. V dnešní době se -glukany těší zvýšené pozornosti zejména kvůli imunomodulační aktivitě a využitelnosti ve farmaceutickém a potravinařském průmyslu. Saccharomyces cerevisiae je dodnes jediným kvasinkovým zdrojem požívaným v biotechnologické produkci. Avšak některé kvasinky z oddělení Basidiomycetes, které jsou schopny produkce lipidů a karotenoidů, mohou být využity rovněž jako alternativní zdroj -glukanů. Dizertační práce se zabývá možností a optimalizací produkce -glukanů a dalších mikrobiálních sacharidů u karotenogenních kvasinek a mikrořas. Testovány byli zástupci rodů Rhodotorula, Sporobolomyces, Cystofilobasidium a Dioshegia. Z nekarotenogenních kvasinek byly do screeningu zařazeny kvasinky rodu Metschnikowia, askomycetní kvasinky a z mikrořas zástupci zelených a červených řas. Experimentální část cílí rovněž na možnosti koprodukce dalších metabolitů, jako jsou lipidy, pigmenty a extracelulární polymery. První část experimentu se zabývá vlivem čtyř C/N poměrů (10:1, 40:1, 70:1 a 100:1) na produkci biomasy, -glukanů, karotenoidů a lipidů. Ze všech testovaných kmenů, S. cerevisiae CCY 21-4-102, C. infirmominiatum CCY 17-18-4, P. rhodozyma CCY 77-1-1 a R. kratochvilovae CCY 20-2-26 vykazovaly nejvyšší produkci -glukanů a byly proto vybrány k podrobnější optimalizaci, zejména osmotického stresu, teploty a zdroje dusíku v kultivačním médiu. Dodatečně, kmen R. kratochvilovae CCY 20-2-26 je schopný produkce extracelulárních glykolipidů a S. pararoseus CCY 19-9-6 extracelulárních polysacharidů. Následně bylo stanoveno množství -glukanů u dalších dvanácti kmenů S. cerevisiae a rovněž možnost produkce polysacharidů u mikrořas.
|
|
|
Testing of biological effect of glucans on cell lines in vitro
Šimková, Eva ; Holub, Jiří (referee) ; Němcová, Andrea (advisor)
The aim of this bachelor thesis is isolation and testing of -glucans from selected strains of yeast. In the theoretical part, characterisation of -glucans, microbial production of -glucans by yeast, determination of polysaccharides, exopolysaccharides and in vitro testing are described. Yeast have a cell wall made up of -glucans and -glucans are known for their healing properties. In the experimental part of this work deals with characterization of selected biomass yeasts in different forms and comparison of their effects and the amount of -glucans in each form. Stains of Metschnikowia pulcherrima, Cystofilobasidium infirmominiatum and Rhodotorula kratochvilovae have been selected for this thesis. Subsequently, the thesis deals with the isolation and testing of isolated -glucans from a selected lyophilised strain of yeast Rhodotorula kratochvilovae. The selected strain was isolated in 2 ways. The first method of isolation that was more friendly to conformation of -glucans due to the effect of ultrasonic homogenization of cells. The second method of isolation was less friendly to -glucans, using acid and base to homogenise them. Analyses of both extraction methods confirmed the presence of isolated -glucans, however it was found that the recovery of both methods was relatively low and requires further optimisation of the procedure. Overall, the better extraction procedure was the second method. A sample of this extract was further tested on the HaCaT cell line. The results of the pilot tests confirmed the cytotoxicity of the extract obtained by us.
|
|
|
PRODUCTION OF BETA-GLUCANS AND OTHER POLYSACCHARIDES BY YEAST AND MICROALGAE
Byrtusová, Dana ; Kráčmar, Stanislav (referee) ; Kovalčík, Adriána (referee) ; Márová, Ivana (advisor)
Beta-glukany jsou polysacharidy složeny z monomerů D-glukózy. V dnešní době se -glukany těší zvýšené pozornosti zejména kvůli imunomodulační aktivitě a využitelnosti ve farmaceutickém a potravinařském průmyslu. Saccharomyces cerevisiae je dodnes jediným kvasinkovým zdrojem požívaným v biotechnologické produkci. Avšak některé kvasinky z oddělení Basidiomycetes, které jsou schopny produkce lipidů a karotenoidů, mohou být využity rovněž jako alternativní zdroj -glukanů. Dizertační práce se zabývá možností a optimalizací produkce -glukanů a dalších mikrobiálních sacharidů u karotenogenních kvasinek a mikrořas. Testovány byli zástupci rodů Rhodotorula, Sporobolomyces, Cystofilobasidium a Dioshegia. Z nekarotenogenních kvasinek byly do screeningu zařazeny kvasinky rodu Metschnikowia, askomycetní kvasinky a z mikrořas zástupci zelených a červených řas. Experimentální část cílí rovněž na možnosti koprodukce dalších metabolitů, jako jsou lipidy, pigmenty a extracelulární polymery. První část experimentu se zabývá vlivem čtyř C/N poměrů (10:1, 40:1, 70:1 a 100:1) na produkci biomasy, -glukanů, karotenoidů a lipidů. Ze všech testovaných kmenů, S. cerevisiae CCY 21-4-102, C. infirmominiatum CCY 17-18-4, P. rhodozyma CCY 77-1-1 a R. kratochvilovae CCY 20-2-26 vykazovaly nejvyšší produkci -glukanů a byly proto vybrány k podrobnější optimalizaci, zejména osmotického stresu, teploty a zdroje dusíku v kultivačním médiu. Dodatečně, kmen R. kratochvilovae CCY 20-2-26 je schopný produkce extracelulárních glykolipidů a S. pararoseus CCY 19-9-6 extracelulárních polysacharidů. Následně bylo stanoveno množství -glukanů u dalších dvanácti kmenů S. cerevisiae a rovněž možnost produkce polysacharidů u mikrořas.
|
guest ::
